/en
بازدید سایت

بازديد صفحات : 10760
بازديد امروز : 1033
كل بازديدها : 45995239
افراد آنلاين : 189

نويسندگان رحیم تقی زادفرید و زهره کدخدا     تاريخ انتشار : 92/08/01
تعيين مقدار آلکالوییدهای کلشی سین
تعيين مقدار آلکالوییدهای کلشی سین
1-  هدف
اين SOP روش بدست آوردن اندازه كلشي سين در كلشي كوم را توضيح مي دهد .
2- روش آزمايش
تهيه نمونه:
ابتدا دو گرم از نمونه پودر شده را وزن كرده و داخل ارلن cc250 مي ريزيم و به آن 50 ميلي ليترمتانول اضافه مي‌كنيم و درب آنرا محكم مي‌كنيم. ارلن محتوي نمونه و حلال را به مدت 30 دقيقه در دستگاه اولتراسونيك قرار مي‌دهيم و سپس بوسيله كاغذ صافي آنرا صاف مي‌كنيم و بوسيله cc10 متانول ارلن را كر داده و آنرا نيز از كاغذ صافي عبور مي دهيم. محلول حاصل از صاف كردن را به يك دكانتور منتقل مي‌كنيم و سه مرحله هر بار با cc 30 اتردوپترول استخراج مي كنيم. براي جداسازي بهتر و ايجاد دوفاز مجزا به آن cc 10 آب مقطر و cc 10 محلول نمك اشباع اضافه مي كنيم. فاز متانولي (فاز پائيني) را به يك دكانتور خالي منتقل و در اين مرحله سه بار و در در مرتبه با cc 30 كلروفرم عمل استخراج را انجام مي دهيم. (در اين مرحله نيز از محلول نمك اشباع و آب مقطر براي جداسازي و ايجاد فازهاي جداگانه استفاده مي كنيم). فازهاي كلروفرمي (فاز پائيني) حاصل از سه مرحله را جمع آوري مي كنيم.
براي آبگيري از محلول حاصل، به محلول كلروفرمي جمع‌آوري شده، سديم سولفات انيدر اضافه مي‌كنيم و سپس آنرا بوسيله كاغذ صافي صاف مي‌‌‌كنيم و مجدداً با دستگاه روتاري حلال (كلروفرم) آنرا كاملاً خارج مي‌كنيم و مواد باقي مانده را با cc 5 متانول HPLC جمع‌آوري مي‌كنيم.
* تمامي مراحل (به استثناء روتاري) در زير هود انجام شود.
مراحل كار HPLC
روش كار كروماتوگرافي مورد استفاده در اين پژوهش جهت جداسازي و تعيين مقدار آلكالویيد كلشي سين، روش كروماتوگرافي مايع با كاركرد عالي (HPLC) است. اين روش يكي از دقيق ترين و پيشرفته ترين تكنيك ها براي شناخت، تعيين مقدار و جدا كردن اغلب مواد تشکیل دهنده گياه مثل اسيدها، فلاونویيدها، ترپنها و آلكالویيدها است. يكي از محاسن اين روش، داشتن آشكارسازهاي مختلف و ستون هاي پر شده از انواع  مختلف فاز جامد (ثابت) مي باشد كه مي توانند در اين روش مورد استفاده قرار گيرند.
الف- تهيه محلول ها جهت تزريق به دستگاه HPLC
براي تهية غلظت هاي استاندارد جهت رسم منحنی کالیبراسیون، ابتدا mg 10 از استاندارد كلشي سين وزن کرده، سپس با متانول به حجم ml 10 می رسانند.
ml 1 از آن را برداشته با متانول به حجم ml 10 می رسانند، تا غلظت  100 میکرگرم بر میلی لیتر تهيه شود.
از این محلول با غلظت  100، ml 3 میکرگرم بر میلی لیتر برداشته با متانول به حجم ml 10 می رسانند تا غلظت  30 میکرگرم بر میلی لیتر به دست آيد.
از غلظت 100میکرگرم بر میلی لیتر، ml 5 برداشته با متانول به حجم ml 10می رسانند تا محلول به غلظت 50میکرگرم بر میلی لیتر برسد.
از غلظت 100میکرگرم بر میلی لیتر، ml 5/7 برداشته با متانول به حجم ml 10 می رسانند تا غلظت 75میکرگرم بر میلی لیتر به دست آيد.
همچنين از غلظت 100میکرگرم بر میلی لیتر، ml 9 برداشته با متانول به حجم ml 10 می رسانند تا غلظت 90میکرگرم بر میلی لیتر حاصل شود.
براي تهيه غلظت 120میکرگرم بر میلی لیتر، ابتدا mg 10 از استاندارد كلشي را توزین نموده، آن را با متانول به حجم ml 10 مي رسانند. ml 2/1 از آن را برداشته با  متانول به حجم ml 10 مي رسانند تا غلظت 120میکرگرم بر میلی لیتر به دست آيد.
ب- تهية حلال ( فاز متحرك )
حلال مورد استفاده شامل بافر فسفات و استونيتريل (77 : 23) مي باشد. براي تهيه بافر فسفات، mg 800 از NaH2P04 و(g4/1 NaH2P04 موجود ) mg 200 از Na2HP04 (g504/0 از Na2HP04 موجود ) توزین شود. سپس با  آبHPLC گريد به حجم ml1000 مي رسانيم و pH را دقيقا روي 6 تنظيم مي كنيم .
فاز متحرك        : بافر فسفات و استونيتريل (77 : 23)
فلو            : 2ml/min
دتكتور UV        : طول موج 243 nm
ستون            : Bondapak C18 (3.9*300)
حجم تزريق        :  50ميكروليتر
مشخصات HPLC    : Knauer
دستگاه گاززدا        : degasser  knauer
پمپHPLC        : HPLC  pump  K-1001
دستگاه تزريق اتوماتيك    : Auto Samler  knauer
دتكتور UV        :UV  detector  K-2501
دستگاه چمبر        :Dynamic  mixing  chamber
منبع مقاله : In house
مجوزها و گواهینامه ها
  • مجوز مجوز
  • مجوز مجوز
  • مجوز مجوز
  • مجوز مجوز
  • مجوز مجوز
  • مجوز مجوز
  • مجوز مجوز
تماس با ما
دفتر تهران: 88282482 021
عضويت در خبرنامه
پست الكترونيك  

  درخواست
صفحه اصلي | نقشه سايت | تماس با ما
كليه حقوق اين وب سايت متعلق به شركت آدونيس گل دارو مي باشد